Biotechniken

Bei dieser Technik wird eine fremde DNA-Sequenz in den Vorkern (Pronukleus) von befruchteten Maus-Eizellen (Zygoten) injiziert, die sich noch im Ein-Zell-Stadium befinden. Anschließend werden die injizierten Zygoten von Ammenmäusen ausgetragen. Ein Teil der geborenen Mäuse hat die fremde DNA in ihr eigenes Genom integriert.

Bei dieser Technik handelt es sich um eine Endonuklease-vermittelte, zielgerichtete Genom-Editierung. Cas9, guide RNA und falls gewünscht auch DNA (Reparatur-Template) werden in das Cytoplasma von befruchteten Maus-Eizellen (Zygoten) injiziert und diese anschließend in Ammenmäuse transferiert. Ein Teil der daraus entstehenden Nachkommen besitzt eine entsprechende Modifizierung ihres Genoms an der beabsichtigten Stelle. 

Eine gewünschte DNA-Sequenz wird in embryonale Stammzellen von Mäusen (ES-Zellen) eingebracht und die genetisch modifizierten ES-Zellen in frühe Mausembryonen (Morulas oder Blastozysten) injiziert. Die Zellen mit der Fremd-DNA integrieren sich nach der Injektion in den Embryo. So lassen sich chimäre Mäuse mit Mutationen in bestimmten Genen erzeugen (z.B. „Knock-out"-Mäuse). Die beobachteten Effekte bei Mäusen mit solchen Knock-out-Mutationen erlauben Rückschlüsse über die biologische Funktion, die das stillgelegte Gen normalerweise wahrnimmt.